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Investigadores/as Institucionales

Ripa, InesAutor o CoautorBello-Morales, RaquelAutor (correspondencia)Lopez-Guerrero, Jose AntonioAutor (correspondencia)

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4 de agosto de 2025
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Artículo
Sí

Polyclonal LC3B Antibodies Generate Non-Specific Staining in the Nucleus of Herpes Simplex Virus Type 1-Infected Cells: Caution in the Interpretation of LC3 Staining in the Immunofluorescence Analysis of Viral Infections

Publicado en: International Journal Of Molecular Sciences. 26 (14): 6682- - 2025-07-11 26(14), DOI: 10.3390/ijms26146682

Autores:

Ripa, I; Andreu, S; Galdo, D; Caballero, O; Bello-Morales, R; López-Guerrero, JA
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Afiliaciones

CSIC, Ctr Biol Mol Severo Ochoa, Madrid 28049, Spain - Autor o Coautor
Univ Autonoma Madrid, Dept Mol Biol, Madrid 28049, Spain - Autor o Coautor

Resumen

The most common marker used to monitor autophagy is the microtubule-associated protein light chain 3 (LC3). Upon induction of autophagy, LC3 is conjugated to phosphatidylethanolamine and targeted to autophagic membranes, which can be easily detected by immunofluorescence. However, this technique has some limitations. During the early stages of HSV-1 infection, strong LC3B nuclear staining is observed within the viral replication compartments. This staining is only detected when using polyclonal antibodies. It is noteworthy that monoclonal antibodies or the GFP-LC3 plasmid do not reveal any nuclear LC3 staining. Interestingly, LC3B is not detected in the nuclear fraction of infected cells by Western blotting, even when polyclonal antibodies are used. In infected LC3B knockout cells, nuclear staining is still observed when using polyclonal LC3B antibodies. This suggests that polyclonal LC3B antibodies generate non-specific nuclear staining in infected cells, which could result in misinterpretation and erroneous conclusions. These findings raise questions about the reliability of LC3-immunofluorescence assays in herpesvirus infections. It is imperative that the methodology employed for monitoring autophagy by immunofluorescence in viral infections be reviewed and updated, and that the specificity of anti-LC3B antibodies be tested before use. To ensure the accuracy of the results, it is essential to validate this technique with additional assays, such as by immunoblot analysis or via the use of autophagy-deficient cell lines.
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Palabras clave

ActivationAnimalsAntibodiesAutophagyCell nucleusChlorocebus aethiopsCompartmentsDegradationFluorescent antibody techniqueForHerpes simplexHerpes simplex virus type 1Herpesvirus 1, humanHumansInhibitionLc3 antibodyMap1lc3b protein, humanMicrotubule-associated proteinsNeurovirulenceOligodendrocytOligodendrocytePkrProteinsPunctaReplicationReplication compartmentStaining and labeling

Indicios de calidad

Impacto bibliométrico. Análisis de la aportación y canal de difusión

El trabajo ha sido publicado en la revista International Journal Of Molecular Sciences debido a la progresión y el buen impacto que ha alcanzado en los últimos años, según la agencia WoS (JCR), se ha convertido en una referencia en su campo. En el año de publicación del trabajo, 2025, se encontraba en la posición 72/320, consiguiendo con ello situarse como revista Q1 (Primer Cuartil), en la categoría Biochemistry & Molecular Biology.

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Impacto y visibilidad social

Desde la dimensión de Influencia o adopción social, y tomando como base las métricas asociadas a las menciones e interacciones proporcionadas por agencias especializadas en el cálculo de las denominadas “Métricas Alternativas o Sociales”, podemos destacar a fecha 2026-01-15:

  • El uso, desde el ámbito académico evidenciado por el indicador de la agencia Altmetric referido como agregaciones realizadas por el gestor bibliográfico personal Mendeley, nos da un total de: 3.
  • La utilización de esta aportación en marcadores, bifurcaciones de código, añadidos a listas de favoritos para una lectura recurrente, así como visualizaciones generales, indica que alguien está usando la publicación como base de su trabajo actual. Esto puede ser un indicador destacado de futuras citas más formales y académicas. Tal afirmación es avalada por el resultado del indicador “Capture” que arroja un total de: 3 (PlumX).

Con una intencionalidad más de divulgación y orientada a audiencias más generales podemos observar otras puntuaciones más globales como:

  • El Score total de Altmetric: 2.
  • El número de menciones en la red social X (antes Twitter): 2 (Altmetric).

Es fundamental presentar evidencias que respalden la plena alineación con los principios y directrices institucionales en torno a la Ciencia Abierta y la Conservación y Difusión del Patrimonio Intelectual. Un claro ejemplo de ello es:

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Análisis de liderazgo de los autores institucionales

Existe un liderazgo significativo ya que algunos de los autores pertenecientes a la institución aparecen como primer o último firmante, se puede apreciar en el detalle: Primer Autor (RIPA PERALTA, INES) y Último Autor (LOPEZ GUERRERO, JOSE ANTONIO).

los autores responsables de establecer las labores de correspondencia han sido BELLO-MORALES ARROYO, ANGELES RAQUEL y LOPEZ GUERRERO, JOSE ANTONIO.

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Reconocimientos ligados al ítem

This research was funded by the Ministerio de Ciencia e Innovacion, Spain (PID2022-140632NB-I00).
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